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博士生预答辩报告公示-肖洪涛-201511210104

文:教学管理办公室 发布时间:2019-10-21 09:44:25 浏览量:305

报告题目:肿瘤靶向羟氯喹前体药物的设计合成及其药理活性研究

报告概况:

本研究以天然多不饱和脂肪酸α亚麻酸(LNA)作为载体,经过不断优化合成方法,通过共价连接与羟氯喹合成了具有抗肿瘤活性的双效靶向前药—羟氯喹亚麻酸酯(AHQ),并对其抗肿瘤活性、作用机制及代谢过程进行研究。运用MTT检测AHQ对多种肿瘤细胞增殖的抑制作用,并且运用流式细胞术研究AHQ诱导结肠癌细胞周期阻滞和凋亡的活性,采用不同的给药方式探究了AHQ对小鼠结肠癌CT26移植瘤模型的影响,并对其机制进行了研究以及运用Real-time PCR。此外,对羟氯喹(HCQ)和AHQ在SD大鼠和Beagle犬体内的药物代谢动力学特性进行了研究,确证了AHQ具有较好的体内药代动力学特征,为HCQ在肿瘤治疗中的应用提供新的途径,为抗肿瘤药物的开发提供新的思路和策略。

首先基于HCQ具备成酯可能性的化学结构,提出以LNA作为载体,通过结构改造合成其靶向前体药物,从而改善其理化性质,进而改善活性和体内特性的设想。合成方法如下:利用酸碱中和反应以硫酸羟氯喹为原料药合成HCQ,通过缩合反应原理于室温下以亚麻酸、EDC、HCQ和DMAP为原料进行反应,N2保护,TLC监测反应进度。反应完成后,在反应液中加入60-80目粗硅胶,减压蒸除溶剂,搅拌均匀。使用200-300目硅胶装柱,干法上样,柱层析分离得到淡黄色粘稠状液体纯品,再经1H NMR图谱和MS图谱分析。研究表明该方法合成的AHQ纯度高、产率较高,且重复性较好。

随后大家对AHQ的体内外抗肿瘤活性进行了研究,通过MTT对AHQ对不同肿瘤细胞体外抑制活性和时效关系进行了研究,IC50值结果显示AHQ对多种肿瘤细胞均有较好的抑制作用,其中对结肠癌细胞HT29的抑制作用最好(IC50=0.692?g/mL),且对肿瘤细胞的抑制作用具有较好的选择性:在人正常细胞HUVEC细胞的抑制作用明显降低(IC50=18.35?g/mL),同时AHQ的这种抑制作用是呈时间和剂量依赖性的。流式细胞术检测结果发现AHQ可以引起人结肠癌细胞HCT116和HT29的G1期阻滞同时引起凋亡的发生,并且这种周期阻滞是呈剂量依赖性的。AHQ对小鼠结肠癌CT26移植瘤模型的抑制作用的研究结果表明AHQ能够通过口服给药有效抑制CT26细胞在体内的生长,以150 mg/kg剂量连续给药15天,能够达到62.2%的抑瘤率,药效与DOX相同,对体重的影响比DOX小。在AHQ对小鼠结肠癌CT26移植瘤模型的抑制作用的机制研究中,大家发现150mg/kg的AHQ显著性抑制了CT26小鼠肿瘤组织中LC3,NF-κB,p26,Rhoj, cdc和ERK基因的mRNA的表达。利用Western Blot方法检测小鼠肿瘤组织蛋白中Akt、cdc25C、cdc2、CyclinB1等蛋白表达和活性后发现AHQ可以抑制Akt的磷酸化,同时也可以抑制cdc25C的磷酸化。为了进一步确认,大家对AHQ在人结肠癌细胞HCT116裸鼠移植瘤模型的影响进行了研究,AHQ按照一定的给药剂量每天腹腔或静脉给药一次,连续给药21-24天。研究结果显示, AHQ在80mg/kg 剂量组具有较好的抑瘤活性,抑瘤率为26%。

最后大家对测定血浆中AHQ的方法学进行确证,包括分析方法的专属性、准确度、精密度以及考察回收率和基质效应等,本试验采用沉淀蛋白的方法处理血浆样品,LC/MS/MS法测定生物样品中的AHQ/HCQ,本方法的血浆用量为100μL,最低定量浓度均为1.0 ng/mL。此方法专属性、准确性、灵敏度高,样品处理过程简便,适合临床前药代动力学研究。AHQ在两种不同种属动物中进行的药代动力学研究的结果表明AHQ经灌胃给予实验动物后,其在SD大鼠和Beagle犬体内吸取迅速,达峰时间均约为1~1.5h,达峰浓度分别平均约为1055ng/mL、421ng/mL,与相同剂量静脉注射后的达峰浓度相比,AHQ在SD大鼠和Beagle犬体内的绝对生物利用度分别约为30%、40%,AHQ在两种动物体内迅速代谢消除,其消除半衰期分别约为2.7h(静脉注射组消除半衰期为0.6h)、3.3h(静脉注射组消除半衰期为1.5h),HCQ是AHQ在体内的主要代谢产物,AHQ向HCQ的转化率分别约为50%、87%。AHQ在SD大鼠体内广泛分布,其与HCQ的分布规律相同,提示AHQ在不同组织中均能够较好地转化为HCQ,不同组织中AHQ/HCQ的分布由大到小的顺序为:肝脏>肾脏>小肠>肺脏>心脏>胃>脾脏>脑,本研究合成的新的AHQ靶向前体药物改善了HCQ原来的理化性质及分布特点。

答辩评委:张志荣,蒋学华,谭正怀,童荣生,师健友

答辩秘书:刘易陇

报告人:肖洪涛2015级博士201511210104

报告时间:2019年10月29日15:30

报告地点:四川省人民医院药学部四楼信息资料室

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